細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mLURIDINE尿苷超級50G58-96-8RT

A375細(xì)胞，人惡性色素瘤細(xì)胞 糞腸球菌 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480]同;9,10-二輕-9-氧 cnthronq;9(10H)-cnthrccqnonq;Ccrbothronq;cnthrcnonq 90-44-8

ANGPTL2 Protein Mouse 重組小鼠 ANGPTL2 / Angiopoietin-like 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)OTAC硬脂基基錄化5克色譜用，36～50目

KLE(人內(nèi)膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 DLL1 / Delta-like 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-纈酸5克RT，避光

EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴細(xì)胞;B95-8(支鏈淀粉)
HBE(人支氣管上皮樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基CM去噻唑基甲基 利托那韋Desthiazolylmethyl Ritonavir質(zhì)量規(guī)格：美國進口

腎動脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-去甲基羅格列酮-d4N-Desmethyl Rosiglitazone-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進口

RPRD1B Others Human 人 RPRD1B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羅格列酮（鉀鹽）Rosiglitazone (potassium salt)質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小鼠腹水瘤細(xì)胞;S-180羅格列酮鹽酸鹽rosiglitazone 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

HPAEC細(xì)胞，人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞 猴腎細(xì)胞系,BSC-1細(xì)胞 CL-0082F9(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×25-羥基羅格列酮5-Hydroxy Rosiglitazone質(zhì)量規(guī)格：美國進口
永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞人口腔角質(zhì)細(xì)胞(HOK)( 5×105 ) NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞 Rattus9-(2-羥丙基-d6)腺嘌呤9-[2-(Hydroxypropyl-d6] Adenine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

猴腎細(xì)胞;Vero IgCD4(R)-9-(2-羥丙基)腺嘌呤(R)-9-[2-(Hydroxypropyl] Adenine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

FST Others Mouse 小鼠 Follistatin / FST 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-1酸甘油酸激酶3-Phosphoglyceric Phosphokinase質(zhì)量規(guī)格：1000u/mg,Sigma分裝

HPB-ALL(懸浮) T細(xì)胞白血病1,5-二1酸-D-核酮糖/1,5二1酸核酮糖d-ribulose 1,5-diphosphate/RuDP質(zhì)量規(guī)格：90.0%,Sigma

769-P人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 769-P human renal cell carcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS酸性蛋白酶；蛋白酶來自佐氏曲霉Acidic Protease from Aspergillus 質(zhì)量規(guī)格：BR,50u/mg
細(xì)胞接受后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進行細(xì)胞傳代。
5） 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，